2 × டாக் பிளாட்டினம் பிசிஆர் கலவை

அல்ட்ரா-தூய ஹாட்ஸ்டார்ட் உயர்-நம்பகத்தன்மை தெர்மோஸ்டபிள் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்.

டாக் பிளாட்டினம் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் என்பது 3′-5 ′ எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு மற்றும் 5′-3 ′ எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாட்டுடன் கூடிய ரசாயன மாற்றப்பட்ட ஹாட்ஸ்டார்ட் டாக் பாலிமரேஸ் ஆகும். டாக் பிளாட்டினம் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸின் என்சைம் செயல்பாடு அறை வெப்பநிலையில் தடுக்கப்படுகிறது. பிசிஆர் எதிர்வினையின் ஆரம்ப சுழற்சிக்கு முன் குறைந்த வெப்பநிலையில் ப்ரைமர் அல்லாத குறிப்பிட்ட அனீலிங் அல்லது ப்ரைமர் டைமரால் ஏற்படும் குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கத்தைத் தவிர்த்து, அதன் செயல்பாட்டை 94 ° C வெப்பநிலையில் 5-10 நிமிடங்களுக்கு பிறகு மட்டுமே செயல்படுத்த முடியும். மற்றும் PCR எதிர்வினையின் தனித்தன்மை. கூடுதலாக, டாக் பிளாட்டினம் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மிக அதிக நம்பகத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளது, இது பிஃபு பாலிமரேஸுக்கு இரண்டாவது சிறந்தது. டிஎன்ஏ பாலிமரைசேஷனின் நீட்டிப்பு வேகம் பிஃபு பாலிமரேஸை விட வேகமானது மற்றும் பெருக்க செயல்திறன் அதிகமாக உள்ளது.

பூனை இல்லை பேக்கிங் அளவு
4992789 5x1ml
4992790 5 × 1 மிலி

தயாரிப்பு விவரம்

சோதனை உதாரணம்

அடிக்கடி கேட்கப்படும் கேள்விகள்

தயாரிப்பு குறிச்சொற்கள்

செயல்பாட்டு வரையறை

1 யூனிட் (யு) டாக் பிளாட்டினம் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் செயல்பாடு 10 என்எம்ஓஎல் டிஆக்ஸிநியூக்ளியோடைட்களை அமில-கரையாத பொருட்களில் 74 நிமிடங்களுக்குள் செயல்படுத்தப்பட்ட சால்மன் விந்து டிஎன்ஏவைப் பயன்படுத்தி டெம்ப்ளேட்/ப்ரைமராகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.

தர கட்டுப்பாடு

SDS-PAGE கண்டறிதலின் தூய்மை 99%க்கும் அதிகமாக உள்ளது; வெளிப்புற நியூக்ளியீஸின் செயல்பாடு எதுவும் கண்டறியப்படவில்லை; மனித மரபணுவில் ஒற்றை நகல் மரபணுவை திறம்பட பெருக்க முடியும்; ஒரு வாரத்திற்கு அறை வெப்பநிலையில் சேமிக்கப்படும் போது குறிப்பிடத்தக்க செயல்பாட்டு மாற்றம் இல்லை.

முக்கிய தொழில்நுட்ப அளவுருக்கள்

இது 5′-3 ′ எக்ஸானுக்ளியீஸ் செயல்பாடு மற்றும் 3′-5 ′ எக்ஸான்யூக்ளியீஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது, மேலும் அதன் நம்பகத்தன்மை Pfu பாலிமரேஸுக்கு அடுத்ததாக உள்ளது. டாக் பிளாட்டினம் பாலிமரேஸின் நீட்டிப்பு வேகம் Pfu பாலிமரேஸை விட வேகமானது மற்றும் பெருக்க செயல்திறன் அதிகமாக உள்ளது. பிசிஆர் தயாரிப்புகளை நேரடியாக அப்பட்டமான முடிவுக்கு இணைக்கலாம் அல்லது டிஏ திசையன் மூலம் குளோன் செய்யலாம். குளோனிங் செயல்திறனை மேம்படுத்த வேண்டும் என்றால், TA திசையனில் குளோனிங் செய்வதற்கு முன் முதலில் சுத்திகரித்து 3'-dA ஓவர்ஹாங்குகளைச் சேர்க்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

ஒன்-டியூப் டாக் பிளாட்டினம் மாஸ்டர்மிக்ஸ் (தேசிய உயர் தொழில்நுட்ப தயாரிப்பு சான்றிதழ்)

Q டாக் பிளாட்டினம் மாஸ்டர்மிக்ஸ் பிசிஆர் எதிர்வினையின் தனித்தன்மையையும் உணர்திறனையும் மேம்படுத்தியுள்ளது மற்றும் உயர் ஜிசி உள்ளடக்கம், இரண்டாம் நிலை அமைப்பு போன்ற சிக்கலான வார்ப்புருக்களை அதிகரிக்க முடியும். இலக்கு டெம்ப்ளேட்டின் 2 பிரதிகள் குறைவாகப் பெருக்க முடியும், மேலும் துல்லியமான சோதனை முடிவுகளை உறுதி செய்கிறது.

தனித்துவமான டாக் பிளாட்டினம் மாஸ்டர்மிக்ஸ் சூத்திரம் முழு எதிர்வினை அமைப்பையும் மிகவும் நிலையானதாக ஆக்குகிறது, மேலும் 4 ° C வெப்பநிலையில் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் அல்லது நீண்ட கால சேமிப்பால் செயல்பாடு பாதிக்கப்படாது.

And நிலையான மற்றும் திறமையான முன் தயாரிக்கப்பட்ட பிசிஆர் கலந்த தீர்வு செயல்பாட்டை வேகமாகவும் எளிமையாகவும் ஆக்குகிறது, இது உழைப்பு தீவிரம் மற்றும் மாதிரி பிழையை பெரிதும் குறைக்கிறது. உயர் செயல்திறன் கொண்ட பிசிஆர் மேம்படுத்துபவர் மற்றும் ஆப்டிமைசர் ஆகியவை கலவையில் சேர்க்கப்பட்டுள்ளன, இது பிசிஆர் நிலைமைகளின் தேவைகளை குறைக்கிறது.

Product இந்த தயாரிப்பில் சாயம் கொண்ட மற்றும் சாயம் இல்லாத அமைப்புகள் உள்ளன. சாயம் கொண்ட மாஸ்டர்மிக்ஸ் தயாரிப்புகளை ஏற்றும் இடையகத்தைச் சேர்க்காமல், PCR க்குப் பிறகு நேரடியாக மின்னாற்பகுப்பு செய்யலாம்.

விண்ணப்பங்கள்

இது மரபணுக்கள் போன்ற சிக்கலான டெம்ப்ளேட்களிலிருந்து அதிக நம்பகத்தன்மை கொண்ட தயாரிப்புகளைப் பெருக்க Pfu பாலிமரேஸை மாற்ற முடியும், மேலும் இது வெளிப்பாடு மரபணுக்களின் குளோனிங், தளம் சார்ந்த பிறழ்வுகள் மற்றும் ஒற்றை நியூக்ளியோடைட் பாலிமார்பிசம் (SNP) பகுப்பாய்வு போன்ற பயன்பாடுகளுக்கு ஏற்றது.

PCR ப்ரைமர்களை வடிவமைப்பதில் முன்னெச்சரிக்கைகள்:

ப்ரைமர் நீளம் பொதுவாக 20-25 மெர். இருப்பினும், நீண்ட துண்டு பிசிஆரைச் செய்யும்போது, ​​ப்ரைமர் நீளம் 30-35 மெர் ஆக அதிகரிக்கப்பட வேண்டும்.

Pri இரண்டு ப்ரைமர்களுக்கு இடையே, குறிப்பாக 3. முடிவில் உள்ள கடைசி 3 தளங்களுக்கு இடையே எந்தவிதமான இணைப்பும் இல்லை.

C GC உள்ளடக்கம் 50-60%ஆக இருக்க வேண்டும், மேலும் உள்ளூர் பணக்கார GC அல்லது AT ஐ தவிர்க்கவும். ப்ரைமர் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டை உறுதியாக பிணைக்க, 3. முடிவில் பணக்கார கட்டமைப்பைத் தவிர்க்கவும்.

இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்பை உருவாக்க ப்ரைமரைத் தவிர்க்கவும்.

M ஒருவருக்கொருவர் நெருக்கமாக Tm வெப்பநிலையுடன் இரண்டு ப்ரைமர்களைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.

PCR க்கான ப்ரைமர்களின் Tm மதிப்பின் கணக்கீடு:

ப்ரைமர் 20 மெருக்கு குறைவாக இருக்கும்போது: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).

The ப்ரைமர் 20 மெருக்கு மேல் இருக்கும்போது: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, இதில் L என்பது ப்ரைமரின் நீளம்.

அனீலிங் வெப்பநிலையை (Tm-5) ° C இல் அமைக்கவும்.

பிசிஆர் ப்ரைமர் உள்ளீடு

ப்ரைமர்களின் பொருத்தமான இறுதி செறிவு 0.1 μM மற்றும் 1.0 μM க்கு இடையே தேர்ந்தெடுக்கப்படலாம். மிகக் குறைந்த ப்ரைமர் செறிவு பெருக்க தயாரிப்புகளின் குறைந்த மகசூலுக்கு வழிவகுக்கிறது, அதே நேரத்தில் அதிக ப்ரைமர் செறிவு குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கத்திற்கு அதிக வாய்ப்புள்ளது. பொதுவாக, டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏவின் அளவு பெரியதாக அல்லது சிக்கலான டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏ (மனித மரபணு டிஎன்ஏ போன்றவை) ஒரு டெம்ப்ளேட்டாகப் பயன்படுத்தப்படும் போது, ​​ப்ரைமர் செறிவு குறைவாக இருக்க வேண்டும். டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏவின் அளவு சிறியதாக அல்லது எளிய டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏ (எ.கா. பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ, முதலியன) ஒரு டெம்ப்ளேட்டாகப் பயன்படுத்தப்படும் போது, ​​ப்ரைமர் செறிவு அதிகமாக இருக்க வேண்டும்.

அனைத்து தயாரிப்புகளையும் ODM/OEM க்கு தனிப்பயனாக்கலாம். விவரங்களுக்கு,தயவுசெய்து தனிப்பயனாக்கப்பட்ட சேவையைக் கிளிக் செய்யவும் (ODM/OEM)


  • முந்தைய:
  • அடுத்தது:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example 1 kb துண்டைப் பெருக்க மரபணு டிஎன்ஏவைப் பயன்படுத்தவும்.
    கே: பெருக்க பட்டைகள் இல்லை

    A-1 டெம்ப்ளேட்

    டெம்ப்ளேட்டில் புரத அசுத்தங்கள் அல்லது தாக் தடுப்பான்கள் போன்றவை உள்ளன - டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டை சுத்திகரிக்கவும், புரத அசுத்தங்களை அகற்றவும் அல்லது டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏவை சுத்திகரிப்பு கருவிகளுடன் பிரித்தெடுக்கவும்.

    Temp டெம்ப்ளேட்டின் அழித்தல் முழுமையடையவில்லை —— தகுந்த முறையில் டீனேட்டரேஷன் வெப்பநிலையை அதிகரிக்கவும் மற்றும் டீனேட்டரேஷன் நேரத்தை நீடிக்கவும்.

    ■ டெம்ப்ளேட் சீரழிவு —— டெம்ப்ளேட்டை மீண்டும் தயார் செய்யவும்.

    ஏ -2 ப்ரைமர்

    ப்ரைமர்களின் மோசமான தரம் —— ப்ரைமரை மீண்டும் ஒருங்கிணைக்கவும்.

    Mer ப்ரைமர் சிதைவு —— அதிக செறிவு கொண்ட ப்ரைமர்களை சிறிய அளவில் பாதுகாக்க. பல உறைபனி மற்றும் கரைத்தல் அல்லது நீண்ட கால 4 ° C கிரையோபிரசர்வ் ஆகியவற்றைத் தவிர்க்கவும்.

    Pri ப்ரைமர்களின் பொருத்தமற்ற வடிவமைப்பு (எ.கா. ப்ரைமர் நீளம் போதாது, ப்ரைமர்களுக்கு இடையில் டைமர் உருவாகிறது, முதலியன) -மறுவடிவமைப்பு ப்ரைமர்கள் (ப்ரைமர் டைமர் மற்றும் இரண்டாம் நிலை அமைப்பு உருவாவதைத் தவிர்க்கவும்)

    A-3 Mg2+செறிவு

    எம்ஜி2+ செறிவு மிகக் குறைவு —— சரியாக Mg அதிகரிக்கவும்2+ செறிவு: Mg ஐ மேம்படுத்தவும்2+ உகந்த Mg ஐ தீர்மானிக்க 0.5 mM இடைவெளியுடன் 1 mM முதல் 3 mM வரை தொடர்ச்சியான எதிர்வினைகளால் செறிவு2+ ஒவ்வொரு டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமருக்கும் செறிவு.

    A-4 அனீலிங் வெப்பநிலை

    அதிக அனீலிங் வெப்பநிலை ப்ரைமர் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டை பிணைப்பதை பாதிக்கிறது. அனீலிங் வெப்பநிலையைக் குறைத்து, 2 ° C சாய்வுடன் நிலையை மேம்படுத்தவும்.

    A-5 நீட்டிப்பு நேரம்

    Extension குறுகிய நீட்டிப்பு நேரம் —— நீட்டிப்பு நேரத்தை அதிகரிக்கவும்.

    கே: தவறான நேர்மறை

    நிகழ்வுகள்: எதிர்மறை மாதிரிகள் இலக்கு வரிசை பட்டைகளையும் காட்டுகின்றன.

    A-1 PCR மாசுபாடு

    Target இலக்கு வரிசை அல்லது பெருக்கப் பொருட்களின் குறுக்கு மாசுபாடு —- எதிர்மறை மாதிரியில் இலக்கு வரிசை கொண்ட மாதிரியை கவனமாக குழாய் செய்யவோ அல்லது மையவிலக்கு குழாயிலிருந்து வெளியேற்றவோ கூடாது. தற்போதுள்ள நியூக்ளிக் அமிலங்களை அகற்றுவதற்கான காரணிகள் அல்லது உபகரணங்கள் ஆட்டோகிளேவ் செய்யப்பட வேண்டும், மேலும் மாசுபாட்டின் இருப்பு எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டு சோதனைகள் மூலம் தீர்மானிக்கப்பட வேண்டும்.

    Ag உலை மாசுபடுதல் ——உலைகள் மற்றும் குறைந்த வெப்பநிலையில் சேமித்தல்.

    ஏ -2 பிரைம்r

    எம்ஜி2+ செறிவு மிகக் குறைவு —— சரியாக Mg அதிகரிக்கவும்2+ செறிவு: Mg ஐ மேம்படுத்தவும்2+ உகந்த Mg ஐ தீர்மானிக்க 0.5 mM இடைவெளியுடன் 1 mM முதல் 3 mM வரை தொடர்ச்சியான எதிர்வினைகளால் செறிவு2+ ஒவ்வொரு டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமருக்கும் செறிவு.

    Pri தவறான ப்ரைமர் வடிவமைப்பு, மற்றும் இலக்கு வரிசை இலக்கு அல்லாத வரிசையுடன் ஒரே மாதிரியானது. —— மறு-வடிவமைப்பு ப்ரைமர்கள்.

    கே: குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கம்

    நிகழ்வுகள்: பிசிஆர் பெருக்கி பட்டைகள் பெரிய அல்லது சிறிய, அல்லது சில நேரங்களில் குறிப்பிட்ட பெருக்கி பட்டைகள் மற்றும் குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கி பட்டைகள் ஏற்படும் எதிர்பார்த்த அளவு முரண்படுகின்றன.

    ஏ -1 ப்ரைமர்

    Pri மோசமான ப்ரைமர் விவரக்குறிப்பு

    —— மறு வடிவமைப்பு ப்ரைமர்.

    Mer ப்ரைமர் செறிவு மிக அதிகமாக உள்ளது ——சீரற்ற வெப்பநிலையை முறையாக அதிகரிக்கவும் மற்றும் நீக்குதல் நேரத்தை அதிகரிக்கவும்.

    A-2 Mg2+ செறிவு

    எம்ஜி2+ செறிவு மிக அதிகமாக உள்ளது —— Mg2+ செறிவை சரியாகக் குறைக்கவும்: Mg ஐ மேம்படுத்தவும்2+ உகந்த Mg ஐ தீர்மானிக்க 0.5 mM இடைவெளியுடன் 1 mM முதல் 3 mM வரை தொடர்ச்சியான எதிர்வினைகளால் செறிவு2+ ஒவ்வொரு டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமருக்கும் செறிவு.

    ஏ -3 தெர்மோஸ்டபிள் பாலிமரேஸ்

    En அதிகப்படியான என்சைம் அளவு —— 0.5 U இன் இடைவெளியில் என்சைம் அளவைக் குறைக்கவும்.

    A-4 அனீலிங் வெப்பநிலை

    Ne அனீலிங் வெப்பநிலை மிகக் குறைவு —— பொருத்தமாக அனீலிங் வெப்பநிலையை அதிகரிக்கவும் அல்லது இரண்டு-நிலை அனீலிங் முறையைப் பின்பற்றவும்

    A-5 PCR சுழற்சிகள்

    P அதிகமான PCR சுழற்சிகள் —— PCR சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கையைக் குறைக்கவும்.

    கே: ஒட்டு அல்லது ஸ்மியர் பட்டைகள்

    ஏ -1 ப்ரைமர்—— மோசமான விவரக்குறிப்பு —- ப்ரைமரை மீண்டும் வடிவமைக்கவும், ப்ரைமரின் நிலை மற்றும் நீளத்தை அதன் தனித்தன்மையை அதிகரிக்க மாற்றவும்; அல்லது உள்ளமை PCR செய்யவும்.

    A-2 டெம்ப்ளேட் DNA

    டெம்ப்ளேட் சுத்தமாக இல்லை — டெம்ப்ளேட்டை சுத்திகரிக்கவும் அல்லது டிஎன்ஏவை சுத்திகரிப்பு கருவிகளுடன் பிரித்தெடுக்கவும்.

    A-3 Mg2+ செறிவு

    --- எம்ஜி2+ செறிவு மிக அதிகம் —— Mg ஐ சரியாகக் குறைக்கவும்2+ செறிவு: Mg ஐ மேம்படுத்தவும்2+ உகந்த Mg ஐ தீர்மானிக்க 0.5 mM இடைவெளியுடன் 1 mM முதல் 3 mM வரை தொடர்ச்சியான எதிர்வினைகளால் செறிவு2+ ஒவ்வொரு டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமருக்கும் செறிவு.

    A-4 dNTP

    - டிஎன்டிபிகளின் செறிவு மிக அதிகமாக உள்ளது - டிஎன்டிபியின் செறிவை சரியான முறையில் குறைக்கவும்

    A-5 அனீலிங் வெப்பநிலை

    --— மிகக் குறைவான அனீலிங் வெப்பநிலை —— அனீலிங் வெப்பநிலையைப் பொருத்தமாக அதிகரிக்கவும்

    ஏ -6 சுழற்சிகள்

    ——————————————————————————————————————————————————————————————————————

    கே: 50 μl PCR எதிர்வினை அமைப்பில் எவ்வளவு டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏ சேர்க்க வேண்டும்?
    ytry
    கே: நீண்ட துண்டுகளை எவ்வாறு பெருக்குவது?

    முதல் படி பொருத்தமான பாலிமரேஸைத் தேர்ந்தெடுப்பது. 3'-5 'எக்ஸான்யூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லாததால் வழக்கமான டாக் பாலிமரேஸ் சரிபார்ப்பு செய்ய முடியாது, மேலும் பொருந்தாதது துண்டுகளின் நீட்டிப்பு செயல்திறனை பெரிதும் குறைக்கும். எனவே, வழக்கமான Taq பாலிமரேஸ் 5 kb ஐ விட பெரிய இலக்கு துண்டுகளை திறம்பட பெருக்க முடியாது. நீட்டிப்பு செயல்திறனை மேம்படுத்துவதற்கும் நீண்ட துண்டு பெருக்கத்தின் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்வதற்கும் சிறப்பு மாற்றம் அல்லது பிற உயர் நம்பகத்தன்மை கொண்ட பாலிமரேஸ் கொண்ட டாக் பாலிமரேஸ் தேர்ந்தெடுக்கப்பட வேண்டும். கூடுதலாக, நீண்ட துண்டுகளின் பெருக்கத்திற்கு ப்ரைமர் டிசைன், டினாடரேஷன் நேரம், எக்ஸ்டென்ஷன் டைம், பஃபர் பிஹெச் போன்றவற்றை சரிசெய்தல் தேவைப்படுகிறது. பொதுவாக, 18-24 பிபி கொண்ட ப்ரைமர்கள் சிறந்த மகசூலுக்கு வழிவகுக்கும். டெம்ப்ளேட் சேதத்தைத் தடுப்பதற்காக, 94 ° C இல் உள்ள நீக்கம் நேரம் 30 வினாடிக்கு அல்லது ஒரு சுழற்சிக்கு குறைவாகக் குறைக்கப்பட வேண்டும், மேலும் பெருக்கத்திற்கு முன் வெப்பநிலையை 94 ° C ஆக உயர்த்தும் நேரம் 1 நிமிடத்திற்கும் குறைவாக இருக்க வேண்டும். மேலும், நீட்டிப்பு வெப்பநிலையை சுமார் 68 ° C ஆக அமைப்பது மற்றும் 1 kb/min விகிதத்திற்கு ஏற்ப நீட்டிப்பு நேரத்தை வடிவமைப்பது நீண்ட துண்டுகளின் பயனுள்ள பெருக்கத்தை உறுதி செய்யும்.

    கே: பிசிஆரின் பெருக்க விசுவாசத்தை எவ்வாறு மேம்படுத்துவது?

    அதிக நம்பகத்தன்மை கொண்ட பல்வேறு டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் பிசிஆர் பெருக்கத்தின் பிழை வீதத்தைக் குறைக்க முடியும். இதுவரை கண்டுபிடிக்கப்பட்ட அனைத்து டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களிலும், பிஃபு என்சைம் மிகக் குறைந்த பிழை வீதத்தையும் அதிக நம்பகத்தன்மையையும் கொண்டுள்ளது (இணைக்கப்பட்ட அட்டவணையைப் பார்க்கவும்). என்சைம் தேர்வுக்கு கூடுதலாக, ஆராய்ச்சியாளர்கள் பிசிஆர் பிறழ்வு விகிதத்தை மேலும் குறைக்கலாம், எதிர்வினை நிலைமைகளை மேம்படுத்துதல், இடையக கலவையை மேம்படுத்துதல், தெர்மோஸ்டபிள் பாலிமரேஸின் செறிவு மற்றும் பிசிஆர் சுழற்சி எண்ணை மேம்படுத்துதல்.

    உங்கள் செய்தியை இங்கே எழுதி எங்களுக்கு அனுப்புங்கள்