2 × Pfu PCR கலவை

அல்ட்ரா-தூய உயர் விசுவாசம் Taq DNA பாலிமரேஸ்.

Pfu டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் ஈ.கோலியில் இருந்து குளோன் செய்யப்பட்ட பைரோகோகஸ் ஃபுரியோசிஸ் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மரபணுவுடன் வெளிப்படுத்தப்பட்டு பல நெடுவரிசை சுத்திகரிப்பு மூலம் சுத்திகரிக்கப்பட்டு பிரிக்கப்படுகிறது. Pfu ஆனது 3′-5 ′ எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டிருப்பதால், அது பாரம்பரிய டிஎன்ஏ டிஎன்ஏ பாலிமரேஸால் முடியாது, அதே நேரத்தில் டிஎன்ஏ பெருக்க செயல்பாட்டில் சரிபார்ப்பு செய்ய முடியும். வென்ட், டீப் வென்ட், டிலி, யுஐடிஎம்ஏ போன்ற பிற டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்கள் ப்ரூஃப் ரீடிங் செயல்பாடுகளைக் கொண்டிருந்தாலும், இதுவரை கண்டுபிடிக்கப்பட்ட அனைத்து டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களிலும் Pfu குறைந்த பொருந்தாத விகிதத்தைக் கொண்டுள்ளது. Pfu டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் பொதுவான டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸை விட சிறந்த வெப்ப நிலைத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளது, மேலும் இது 1 மணி நேரத்திற்கு 95 ° C இல் 90% க்கும் அதிகமான செயல்பாட்டை பராமரிக்க முடியும்.

ஒரு குழாய் Pfu PCR கலவை (தேசிய உயர் தொழில்நுட்ப தயாரிப்பு சான்றிதழ்)

Pfu PCR கலவை PCR எதிர்வினையின் தனித்தன்மையையும் உணர்திறனையும் மேம்படுத்தியுள்ளது மற்றும் உயர் GC உள்ளடக்கம், இரண்டாம் நிலை அமைப்பு மற்றும் போன்ற சிக்கலான வார்ப்புருக்களை அதிகரிக்க முடியும். இலக்கு டெம்ப்ளேட்டின் 2 பிரதிகள் குறைவாகப் பெருக்க முடியும், மேலும் துல்லியமான சோதனை முடிவுகளை உறுதி செய்கிறது.

P தனித்துவமான Pfu MasterMix சூத்திரம் முழு எதிர்வினை அமைப்பையும் மிகவும் நிலையானதாக ஆக்குகிறது, மேலும் 4 ° C இல் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் அல்லது நீண்ட கால சேமிப்பால் செயல்பாடு பாதிக்கப்படாது.

Stable நிலையான மற்றும் திறமையான முன் தயாரிக்கப்பட்ட பிசிஆர் கலவை தீர்வு, செயல்பாட்டை வேகமாகவும் எளிமையாகவும் ஆக்குகிறது, இது தொழிலாளர் தீவிரம் மற்றும் மாதிரி பிழையை பெரிதும் குறைக்கிறது. உயர் செயல்திறன் கொண்ட பிசிஆர் மேம்படுத்துபவர் மற்றும் ஆப்டிமைசர் ஆகியவை கலவையில் சேர்க்கப்பட்டுள்ளன, இது பிசிஆர் நிலைமைகளின் தேவைகளை குறைக்கிறது.

Product இந்த தயாரிப்பில் சாயம் கொண்ட மற்றும் சாயம் இல்லாத அமைப்புகள் உள்ளன. சாயத்தைக் கொண்ட பிசிஆர் மிக்ஸ் தயாரிப்புகளை மாதிரி இடையகத்தைச் சேர்க்காமல் நேரடியாக பிசிஆருக்குப் பிறகு நேரடியாக எலக்ட்ரோஃபோரஸ் செய்யலாம்.

பூனை இல்லை	பேக்கிங் அளவு
4992780	1 மிலி
4992781	5*1 மிலி
4992782	1 மிலி
4992906	5*1 மிலி

எங்களுக்கு மின்னஞ்சல் அனுப்பவும்

தயாரிப்பு விவரம்

பணிப்பாய்வு

அடிக்கடி கேட்கப்படும் கேள்விகள்

தயாரிப்பு குறிச்சொற்கள்

செயல்பாட்டு வரையறை

1 யூனிட் (U) Pfu DNA பாலிமரேஸின் செயல்பாடு 10 nmol deoxynucleotides ஐ அமிலத்தில் கரையாத பொருட்களில் 74 ° C க்கு 30 நிமிடங்களுக்குள் செயல்படுத்தப்பட்ட சால்மன் விந்து DNA ஐ ஒரு டெம்ப்ளேட்/ப்ரைமராகப் பயன்படுத்த தேவையான நொதியின் அளவு என வரையறுக்கப்படுகிறது.

தர கட்டுப்பாடு

SDS-PAGE கண்டறிதலின் தூய்மை 99%க்கும் அதிகமாக உள்ளது; வெளிப்புற நியூக்ளியீஸின் செயல்பாடு எதுவும் கண்டறியப்படவில்லை; மனித மரபணுவில் ஒற்றை நகல் மரபணுவை திறம்பட பெருக்க முடியும்; ஒரு வாரத்திற்கு அறை வெப்பநிலையில் சேமிக்கப்படும் போது குறிப்பிடத்தக்க செயல்பாட்டு மாற்றம் இல்லை.

முக்கிய தொழில்நுட்ப அளவுருக்கள்

இது 3′-5 ′ எக்ஸானுக்ளியீஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது மற்றும் 5′-3 ′ எக்ஸான்யூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லை. டிஎன்ஏ பெருக்கத்தின் நீட்டிப்பு வேகம் டாக் பாலிமரேஸை விட குறைவாக உள்ளது, மேலும் பொதுவாக பிஎஃப்யூ நொதியின் நீட்டிப்பு வேகம் நிமிடத்திற்கு 0.5-1 கேபி ஆகும். Pfu இன் வெப்ப நிலைத்தன்மை Taq ஐ விட சிறந்தது. அதிக GC உள்ளடக்கம் கொண்ட வார்ப்புருக்கள், நீக்கம் வெப்பநிலையை 98 ° C ஆக அதிகரிக்கலாம், இது Pfu பாலிமரேஸின் செயல்பாட்டில் எந்த விளைவையும் ஏற்படுத்தாது. பிசிஆர் தயாரிப்பு மழுங்கிய-முடிவானது, இது டிஏ திசையனுடன் இணைக்கப்படுவதற்கு முன்பு 3'-டிஏ ஓவர்ஹாங்க்களுடன் சேர்க்கப்படலாம் அல்லது அப்பட்டமான-முனை திசையன் மூலம் குளோன் செய்யப்படலாம்

விண்ணப்பங்கள்

மரபணு வெளிப்பாடு குளோனிங், தளம்-இயக்கிய பிறழ்வு, ஒற்றை நியூக்ளியோடைட் பாலிமார்பிசம் (SNP) பகுப்பாய்வு மற்றும் இறுதி பழுது போன்ற டிஎன்ஏவின் அதிக நம்பகத்தன்மை பெருக்கத்திற்கு இதைப் பயன்படுத்தலாம்.

அனைத்து தயாரிப்புகளையும் ODM/OEM க்கு தனிப்பயனாக்கலாம். விவரங்களுக்கு,தயவுசெய்து தனிப்பயனாக்கப்பட்ட சேவையைக் கிளிக் செய்யவும் (ODM/OEM)

முந்தைய: வேகமான தளத்தை இயக்கிய மியூட்டஜெனெசிஸ் கிட்

அடுத்தது: அல்ட்ரா HiFidelity PCR கிட்

1kb துண்டுகளைப் பெருக்க மரபணு டிஎன்ஏவை வார்ப்புருவாகப் பயன்படுத்தவும்.
பிசிஆர் எதிர்வினைக்குப் பிறகு, எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் கண்டறிதலுக்கு 5 μl எடுத்துக் கொள்ளுங்கள்.

கே: பெருக்க பட்டைகள் இல்லை

A-1 டெம்ப்ளேட்

டெம்ப்ளேட்டில் புரத அசுத்தங்கள் அல்லது தாக் தடுப்பான்கள் போன்றவை உள்ளன - டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டை சுத்திகரிக்கவும், புரத அசுத்தங்களை அகற்றவும் அல்லது டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏவை சுத்திகரிப்பு கருவிகளுடன் பிரித்தெடுக்கவும்.

Temp டெம்ப்ளேட்டின் அழித்தல் முழுமையடையவில்லை —— தகுந்த முறையில் டீனேட்டரேஷன் வெப்பநிலையை அதிகரிக்கவும் மற்றும் டீனேட்டரேஷன் நேரத்தை நீடிக்கவும்.

■ டெம்ப்ளேட் சீரழிவு —— டெம்ப்ளேட்டை மீண்டும் தயார் செய்யவும்.

ஏ -2 ப்ரைமர்

ப்ரைமர்களின் மோசமான தரம் —— ப்ரைமரை மீண்டும் ஒருங்கிணைக்கவும்.

Mer ப்ரைமர் சிதைவு —— அதிக செறிவு கொண்ட ப்ரைமர்களை சிறிய அளவில் பாதுகாக்க. பல உறைபனி மற்றும் கரைத்தல் அல்லது நீண்ட கால 4 ° C கிரையோபிரசர்வ் ஆகியவற்றைத் தவிர்க்கவும்.

Pri ப்ரைமர்களின் பொருத்தமற்ற வடிவமைப்பு (எ.கா. ப்ரைமர் நீளம் போதாது, ப்ரைமர்களுக்கு இடையில் டைமர் உருவாகிறது, முதலியன) -மறுவடிவமைப்பு ப்ரைமர்கள் (ப்ரைமர் டைமர் மற்றும் இரண்டாம் நிலை அமைப்பு உருவாவதைத் தவிர்க்கவும்)

A-3 Mg²⁺செறிவு

எம்ஜி²⁺ செறிவு மிகக் குறைவு —— சரியாக Mg அதிகரிக்கவும்²⁺செறிவு: Mg ஐ மேம்படுத்தவும்²⁺ உகந்த Mg ஐ தீர்மானிக்க 0.5 mM இடைவெளியுடன் 1 mM முதல் 3 mM வரை தொடர்ச்சியான எதிர்வினைகளால் செறிவு²⁺ ஒவ்வொரு டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமருக்கும் செறிவு.

A-4 அனீலிங் வெப்பநிலை

அதிக அனீலிங் வெப்பநிலை ப்ரைமர் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டை பிணைப்பதை பாதிக்கிறது. அனீலிங் வெப்பநிலையைக் குறைத்து, 2 ° C சாய்வுடன் நிலையை மேம்படுத்தவும்.

A-5 நீட்டிப்பு நேரம்

Extension குறுகிய நீட்டிப்பு நேரம் —— நீட்டிப்பு நேரத்தை அதிகரிக்கவும்.

கே: தவறான நேர்மறை

நிகழ்வுகள்: எதிர்மறை மாதிரிகள் இலக்கு வரிசை பட்டைகளையும் காட்டுகின்றன.

A-1 PCR மாசுபாடு

Target இலக்கு வரிசை அல்லது பெருக்கப் பொருட்களின் குறுக்கு மாசுபாடு —- எதிர்மறை மாதிரியில் இலக்கு வரிசை கொண்ட மாதிரியை கவனமாக குழாய் செய்யவோ அல்லது மையவிலக்கு குழாயிலிருந்து வெளியேற்றவோ கூடாது. தற்போதுள்ள நியூக்ளிக் அமிலங்களை அகற்றுவதற்கான காரணிகள் அல்லது உபகரணங்கள் ஆட்டோகிளேவ் செய்யப்பட வேண்டும், மேலும் மாசுபாட்டின் இருப்பு எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டு சோதனைகள் மூலம் தீர்மானிக்கப்பட வேண்டும்.

Ag உலை மாசுபடுதல் ——உலைகள் மற்றும் குறைந்த வெப்பநிலையில் சேமித்தல்.

ஏ -2 பிரைம்r

எம்ஜி²⁺ செறிவு மிகக் குறைவு —— சரியாக Mg அதிகரிக்கவும்²⁺ செறிவு: Mg ஐ மேம்படுத்தவும்²⁺ உகந்த Mg ஐ தீர்மானிக்க 0.5 mM இடைவெளியுடன் 1 mM முதல் 3 mM வரை தொடர்ச்சியான எதிர்வினைகளால் செறிவு²⁺ ஒவ்வொரு டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமருக்கும் செறிவு.

Pri தவறான ப்ரைமர் வடிவமைப்பு, மற்றும் இலக்கு வரிசை இலக்கு அல்லாத வரிசையுடன் ஒரே மாதிரியானது. —— மறு-வடிவமைப்பு ப்ரைமர்கள்.

கே: குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கம்

நிகழ்வுகள்: பிசிஆர் பெருக்கி பட்டைகள் பெரிய அல்லது சிறிய, அல்லது சில நேரங்களில் குறிப்பிட்ட பெருக்கி பட்டைகள் மற்றும் குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கி பட்டைகள் ஏற்படும் எதிர்பார்த்த அளவு முரண்படுகின்றன.

ஏ -1 ப்ரைமர்

Pri மோசமான ப்ரைமர் விவரக்குறிப்பு

—— மறு வடிவமைப்பு ப்ரைமர்.

Mer ப்ரைமர் செறிவு மிக அதிகமாக உள்ளது ——சீரற்ற வெப்பநிலையை முறையாக அதிகரிக்கவும் மற்றும் நீக்குதல் நேரத்தை அதிகரிக்கவும்.

A-2 Mg²⁺ செறிவு

எம்ஜி²⁺ செறிவு மிக அதிகமாக உள்ளது —— Mg2+ செறிவை சரியாகக் குறைக்கவும்: Mg ஐ மேம்படுத்தவும்²⁺ உகந்த Mg ஐ தீர்மானிக்க 0.5 mM இடைவெளியுடன் 1 mM முதல் 3 mM வரை தொடர்ச்சியான எதிர்வினைகளால் செறிவு²⁺ ஒவ்வொரு டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமருக்கும் செறிவு.

ஏ -3 தெர்மோஸ்டபிள் பாலிமரேஸ்

En அதிகப்படியான என்சைம் அளவு —— 0.5 U இன் இடைவெளியில் என்சைம் அளவைக் குறைக்கவும்.

A-4 அனீலிங் வெப்பநிலை

Ne அனீலிங் வெப்பநிலை மிகக் குறைவு —— பொருத்தமாக அனீலிங் வெப்பநிலையை அதிகரிக்கவும் அல்லது இரண்டு-நிலை அனீலிங் முறையைப் பின்பற்றவும்

A-5 PCR சுழற்சிகள்

P அதிகமான PCR சுழற்சிகள் —— PCR சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கையைக் குறைக்கவும்.

கே: ஒட்டு அல்லது ஸ்மியர் பட்டைகள்

ஏ -1 ப்ரைமர்—— மோசமான விவரக்குறிப்பு —- ப்ரைமரை மீண்டும் வடிவமைக்கவும், ப்ரைமரின் நிலை மற்றும் நீளத்தை அதன் தனித்தன்மையை அதிகரிக்க மாற்றவும்; அல்லது உள்ளமை PCR செய்யவும்.

A-2 டெம்ப்ளேட் DNA

டெம்ப்ளேட் சுத்தமாக இல்லை — டெம்ப்ளேட்டை சுத்திகரிக்கவும் அல்லது டிஎன்ஏவை சுத்திகரிப்பு கருவிகளுடன் பிரித்தெடுக்கவும்.

A-3 Mg²⁺ செறிவு

--- எம்ஜி²⁺ செறிவு மிக அதிகம் —— Mg ஐ சரியாகக் குறைக்கவும்²⁺ செறிவு: Mg ஐ மேம்படுத்தவும்²⁺ உகந்த Mg ஐ தீர்மானிக்க 0.5 mM இடைவெளியுடன் 1 mM முதல் 3 mM வரை தொடர்ச்சியான எதிர்வினைகளால் செறிவு²⁺ ஒவ்வொரு டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமருக்கும் செறிவு.

A-4 dNTP

- டிஎன்டிபிகளின் செறிவு மிக அதிகமாக உள்ளது - டிஎன்டிபியின் செறிவை சரியான முறையில் குறைக்கவும்

A-5 அனீலிங் வெப்பநிலை

--— மிகக் குறைவான அனீலிங் வெப்பநிலை —— அனீலிங் வெப்பநிலையைப் பொருத்தமாக அதிகரிக்கவும்

ஏ -6 சுழற்சிகள்

——————————————————————————————————————————————————————————————————————

கே: 50 μl PCR எதிர்வினை அமைப்பில் எவ்வளவு டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏ சேர்க்க வேண்டும்?

கே: நீண்ட துண்டுகளை எவ்வாறு பெருக்குவது?

முதல் படி பொருத்தமான பாலிமரேஸைத் தேர்ந்தெடுப்பது. 3'-5 'எக்ஸான்யூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லாததால் வழக்கமான டாக் பாலிமரேஸ் சரிபார்ப்பு செய்ய முடியாது, மேலும் பொருந்தாதது துண்டுகளின் நீட்டிப்பு செயல்திறனை பெரிதும் குறைக்கும். எனவே, வழக்கமான Taq பாலிமரேஸ் 5 kb ஐ விட பெரிய இலக்கு துண்டுகளை திறம்பட பெருக்க முடியாது. நீட்டிப்பு செயல்திறனை மேம்படுத்துவதற்கும் நீண்ட துண்டு பெருக்கத்தின் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்வதற்கும் சிறப்பு மாற்றம் அல்லது பிற உயர் நம்பகத்தன்மை கொண்ட பாலிமரேஸ் கொண்ட டாக் பாலிமரேஸ் தேர்ந்தெடுக்கப்பட வேண்டும். கூடுதலாக, நீண்ட துண்டுகளின் பெருக்கத்திற்கு ப்ரைமர் டிசைன், டினாடரேஷன் நேரம், எக்ஸ்டென்ஷன் டைம், பஃபர் பிஹெச் போன்றவற்றை சரிசெய்தல் தேவைப்படுகிறது. பொதுவாக, 18-24 பிபி கொண்ட ப்ரைமர்கள் சிறந்த மகசூலுக்கு வழிவகுக்கும். டெம்ப்ளேட் சேதத்தைத் தடுப்பதற்காக, 94 ° C இல் உள்ள நீக்கம் நேரம் 30 வினாடிக்கு அல்லது ஒரு சுழற்சிக்கு குறைவாகக் குறைக்கப்பட வேண்டும், மேலும் பெருக்கத்திற்கு முன் வெப்பநிலையை 94 ° C ஆக உயர்த்தும் நேரம் 1 நிமிடத்திற்கும் குறைவாக இருக்க வேண்டும். மேலும், நீட்டிப்பு வெப்பநிலையை சுமார் 68 ° C ஆக அமைப்பது மற்றும் 1 kb/min விகிதத்திற்கு ஏற்ப நீட்டிப்பு நேரத்தை வடிவமைப்பது நீண்ட துண்டுகளின் பயனுள்ள பெருக்கத்தை உறுதி செய்யும்.

கே: பிசிஆரின் பெருக்க விசுவாசத்தை எவ்வாறு மேம்படுத்துவது?

அதிக நம்பகத்தன்மை கொண்ட பல்வேறு டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் பிசிஆர் பெருக்கத்தின் பிழை வீதத்தைக் குறைக்க முடியும். இதுவரை கண்டுபிடிக்கப்பட்ட அனைத்து டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களிலும், பிஃபு என்சைம் மிகக் குறைந்த பிழை வீதத்தையும் அதிக நம்பகத்தன்மையையும் கொண்டுள்ளது (இணைக்கப்பட்ட அட்டவணையைப் பார்க்கவும்). என்சைம் தேர்வுக்கு கூடுதலாக, ஆராய்ச்சியாளர்கள் பிசிஆர் பிறழ்வு விகிதத்தை மேலும் குறைக்கலாம், எதிர்வினை நிலைமைகளை மேம்படுத்துதல், இடையக கலவையை மேம்படுத்துதல், தெர்மோஸ்டபிள் பாலிமரேஸின் செறிவு மற்றும் பிசிஆர் சுழற்சி எண்ணை மேம்படுத்துதல்.

உங்கள் செய்தியை இங்கே எழுதி எங்களுக்கு அனுப்புங்கள்

தயாரிப்புகளின் வகைகள்

ஏன் எங்களை தேர்வு செய்தாய்

நிறுவப்பட்டதிலிருந்து, எங்கள் தொழிற்சாலை கொள்கையை கடைபிடித்து முதல் உலகத்தரம் வாய்ந்த தயாரிப்புகளை உருவாக்கி வருகிறது
முதலில் தரம். எங்கள் தயாரிப்புகள் தொழில்துறையில் சிறந்த நற்பெயரையும் புதிய மற்றும் பழைய வாடிக்கையாளர்களிடையே மதிப்புமிக்க நம்பிக்கையையும் பெற்றுள்ளன.

விசாரணை